E96

Intracelluláris kalciumion koncentráció mérése hemicochlea preparátumon

Halmos György1,2, Zelles Tibor2, Lendvai Balázs2, Csokonai Vitéz Lajos1, Vizi E. Szilveszter2

1Országos Gyógyintézeti Központ, Fül-orr-gégeosztály, Budapest

2MTA, Kísérleti Orvostudományi Kutatóintézet, Budapest

 

A szerzők korábbi előadásukban már beszámoltak eredményeikről, melyet szőrsejtek intracelluláris Ca2+-koncentrációjának vizsgálata során nyertek intakt tengerimalac Corti szervpreparátumot alkalmazva. A korábbi metodika továbbfejlesztése, illetve kombinálása a hemicochlea preparátummal lehetővé teszi a Corti szerv valamennyi sejtjének, így a belső- és külső szőrsejteknek, és pillérsejteknek, a Deiters sejteknek és a többi támasztósejteknek a vizsgálatát is. A hemicochlea preparátumot idáig kizárólag morfológiai és makromechanikai tanulmányokhoz használták, a szerzők először alkalmazzák ezt a metodikát az [Ca2+]i monitorozására.

A kísérletek során 3-4 hetes egerek cochleáit izolálták, majd vibratom segítségével azokat lemetszették. A preparátumot Fura-2/AM kalcium érzékeny festékkel töltötték fel, majd mikroszkóp alatt, kettős gerjesztést követően hűtött CCD kamerával, egysejt szinten detektálták a festék által emittált, [Ca2+]i-t jelző fényt. Az egyedi sejtek elektromos stimuláció és neuromodulátor drogok hatására bekövetkező [Ca2+]i változását figyelték.